EMSA 主要基于蛋白-探針復(fù)合物在在凝膠電泳過程中遷移較慢的原理。根據(jù)實驗設(shè)計特異性和非特異性探針,當(dāng)核酸探針與樣本蛋白混合孵育時,樣本中可以與核酸探針結(jié)合的蛋白質(zhì)與探針形成蛋白-探針復(fù)合物;這種復(fù)合物由于分子量大,在進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳時遷移較慢,而沒有結(jié)合蛋白的探針則較快;孵育的樣本在進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳并轉(zhuǎn)膜后,蛋白-探針復(fù)合物會在膜靠前的位置形成一條帶,說明有蛋白與目標(biāo)探針有互作。
抗體保存得當(dāng)與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當(dāng),大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。以abcam 抗體保存方法為主,同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分的抗體產(chǎn)品!
電泳過程至關(guān)重要,稍有不慎我們就只能對著 「微笑線」和 「皺眉線」 嘆氣,而質(zhì)量好的電泳能讓目的條帶整齊,結(jié)果圖讓人眼前一亮。電泳的支持介質(zhì)為聚丙烯酰胺凝膠,該凝膠的聚合則由丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體在自由基的催化下完成。
細(xì)胞爬片是一種將細(xì)胞培養(yǎng)在玻璃或塑料表面上,使其附著并擴展的技術(shù)。這種技術(shù)可以用于觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞運動、細(xì)胞-細(xì)胞相互作用等。我們在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時,免不了要制備細(xì)胞爬片,爬片質(zhì)量完全決定了最后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。
蛋白質(zhì)組學(xué)可以利用蛋白微數(shù)列、電泳和質(zhì)譜分析法檢測、識別和特征標(biāo)記的蛋白進(jìn)行分析。這些方法有其獨特的優(yōu)點和局限性,根據(jù)各自能力評估蛋白質(zhì)組譜。