固定劑與甲醛不同,戊二醛的這一步反應(yīng)是不可逆的,而且需要氧氣的參與。由于大塊的樣品內(nèi)部氧氣供應(yīng)不足,戊二醛在大塊樣品的內(nèi)部無(wú)法形成穩(wěn)定的生成物,會(huì)導(dǎo)致樣品內(nèi)部的固定效果不佳。因而在使用戊二醛固定時(shí),小塊的樣品固定效果較為理想。戊二醛通過(guò)交聯(lián)作用固定蛋白質(zhì)的過(guò)程會(huì)伴隨氫離子的釋放,使樣品pH值降低。為了維持pH值穩(wěn)定在最佳水平,在戊二醛的固定劑中要加入足量的緩沖液。
鐵染色原理:人體內(nèi)有一定量的以鐵蛋白和含鐵血黃素形式貯存的鐵元素,這些鐵在酸化的低鐵氰化鉀溶液中反應(yīng),生成藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀(普魯士藍(lán)),定位于含鐵的部位。
酶固定化后一般穩(wěn)定性增加,易從反應(yīng)系統(tǒng)中分離,且易于控制,能反復(fù)多次使用。便于運(yùn)輸和貯存,有利于自動(dòng)化生產(chǎn),但是活性降低,使用范圍減小,技術(shù)還有發(fā)展空間。固定化酶是近十余年發(fā)展起來(lái)的酶應(yīng)用技術(shù),在工業(yè)生產(chǎn)、化學(xué)分析和醫(yī)藥等方面有誘人的應(yīng)用前景。
在保存和處理分選后的細(xì)胞時(shí),要始終注意無(wú)菌操作,避免細(xì)胞污染,同時(shí)根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求和細(xì)胞特性選擇合適的方法。
細(xì)胞分裂素的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂。細(xì)胞分裂素不僅能促進(jìn)細(xì)胞分裂,也可以使細(xì)胞體積擴(kuò)大。但和生長(zhǎng)素不同的是,細(xì)胞分裂素是通過(guò)細(xì)胞橫向擴(kuò)大增粗,而不是促進(jìn)細(xì)胞縱向伸長(zhǎng)來(lái)增大細(xì)胞體積的,它對(duì)細(xì)胞的伸長(zhǎng)有一定的抑制效應(yīng)。
胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的血清類型之一。它來(lái)源于胎牛,富含多種營(yíng)養(yǎng)成分和生長(zhǎng)因子,能夠?yàn)榧?xì)胞提供全面的生長(zhǎng)支持。胎牛血清由于未接觸外界環(huán)境,抗體和補(bǔ)體含量低,對(duì)細(xì)胞的潛在毒性小,因此廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其是對(duì)培養(yǎng)環(huán)境要求較高的細(xì)胞類型,如干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等。
滅菌的徹底性是培養(yǎng)基滅菌工程的首要要求。必須確保培養(yǎng)基中的細(xì)菌、病毒、真菌等微生物被完全殺滅,以避免微生物對(duì)實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)造成污染。為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo),需要嚴(yán)格控制滅菌過(guò)程中的溫度、壓力和時(shí)間等參數(shù),確保滅菌效果達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。
反轉(zhuǎn)錄酶主要用于體外cDNA的合成。目前最常用的反轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它們具有依賴于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性,可以以RNA分子為模板,合成出一條DNA鏈。形成的DNA是與RNA模板互補(bǔ)的,因而反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA分子稱之為cDNA。